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酶聯免疫試驗預備之*洗刷方法
ELISA試劑盒剖析洗刷的方法除某些 ELISA 儀器配有特別的自動洗刷儀外,手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種,進程如下:
(1)浸泡式
a.吸干或甩干孔內反響液;
b.用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去);
c.浸泡,行將洗刷液注滿板孔,放置1-2 分鐘,間歇搖擺,浸泡時刻不行隨意縮短;
d.吸干孔內液體。吸干應*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干;
e.重復操作c 和d,洗刷3-4次(或按闡明規則)。在間接法中如本底較高,可增加洗刷次數或延伸浸泡時刻。微量滴定板多選用浸泡式洗刷法。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的是疏水性的,非離子型洗刷劑既含疏水基團,ELISA試劑盒也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵,然后削弱蛋白質與固相載體的,并借助于親水基團和水分子的作用,使蛋白質回復到水溶液狀況,然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑一般是吐溫 20,其濃度可在0.05%-0.2%
之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
zui初用于小珠載體的洗刷,洗刷液僅為蒸餾水乃至可用自來水。洗刷時附接一特別設備,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續沖刷 2 分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2 分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖刷式則好比淋浴,其洗刷作用更為*,且也簡潔、快速。
已有試驗標明,流水沖刷式相同也適用于微量滴定板的洗刷。洗刷時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔外表,洗刷作用更佳。