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抗體課堂:正確選擇同型對照,陽性對照
同型對照的主要目的是確定一抗的結合是特異性的,而不是非特異性的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。同型對照要與一抗的來源、Ig分型和標記*一致。例如:一抗是FITC標記,其抗體分型是小鼠的IgG1,則同型對照要選擇是FITC標記的小鼠的IgG1。這里如同使用流式抗體一樣,同樣的不可離開說明書!
多抗的同型對照:
絕大部分的同型對照產品都是單克隆抗體,因此不適用于作為多克隆抗體的對照(因為多抗含有多種IgG的亞型)。
陽性對照的使用是一個實驗中確定抗體及檢測系統是否正常工作的依據,也是確定待測標本中是否存在待測蛋白的一個依據!尤其是檢測的標本是不確定是否有待測蛋白表達時。因此當實驗沒有陽性結果出現時,的選擇是實驗合適的陽性對照。
說明書上都有推薦的陽性對照。但是如果說明書上沒有推薦時,請參考以下條款:
看看說明書中是否有Abreviews。任何被其他客戶成功檢測的組織、細胞或者裂解物均可以作為合適的陽性對照!
根據說明書上的Swiss-Prot或Omnigene數據庫來查找。這些數據庫經常會列出該蛋白表達的組織,這也可以作為合適的陽性對照!
查查該蛋白的GeneCards吧,這里通常會有蛋白在不同組織的表達水平。
對于不同的問題,不同的測試,相關性的不同的性能,拿流式抗體來說,在使用的過程中要特別謹說明書使用!
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