霉菌的形態觀察

實驗原理

霉(mei)(mei)菌(jun)菌(jun)絲較(jiao)粗大，細(xi)胞(bao)易(yi)收縮變(bian)形(xing)，而(er)且孢子很(hen)容易(yi)飛散，所以制(zhi)標(biao)本時(shi)常用(yong)乳(ru)酸(suan)石炭酸(suan)棉(mian)藍(lan)染色液。此(ci)染色液制(zhi)成的霉(mei)(mei)菌(jun)標(biao)本片其特(te)點是：(a)細(xi)胞(bao)不(bu)變(bian)形(xing)；(b)具(ju)有殺菌(jun)防腐作用(yong)，且不(bu)易(yi)干(gan)燥，能保持較(jiao)長(chang)時(shi)間；(c)溶液本身呈(cheng)藍(lan)色，有一定染色效果。

霉(mei)(mei)菌(jun)自(zi)然(ran)生長(chang)(chang)狀態下的(de)形態，常用載(zai)(zai)玻(bo)(bo)(bo)片觀(guan)察(cha)，此法(fa)是(shi)接種霉(mei)(mei)菌(jun)孢子(zi)于(yu)載(zai)(zai)玻(bo)(bo)(bo)片上(shang)的(de)適宜培(pei)養基上(shang)，培(pei)養后用顯微鏡觀(guan)察(cha)。此外，為(wei)了(le)得到(dao)清晰、完整、保持(chi)自(zi)然(ran)狀態的(de)霉(mei)(mei)菌(jun)形態還可(ke)利用玻(bo)(bo)(bo)璃紙(zhi)透(tou)析(xi)培(pei)養法(fa)進(jin)行(xing)觀(guan)察(cha)。此法(fa)是(shi)利用玻(bo)(bo)(bo)璃紙(zhi)的(de)半透(tou)膜特性(xing)及透(tou)光性(xing)，將(jiang)霉(mei)(mei)菌(jun)生長(chang)(chang)在覆蓋于(yu)瓊脂(zhi)培(pei)養基表面的(de)玻(bo)(bo)(bo)璃紙(zhi)上(shang)，然(ran)后將(jiang)長(chang)(chang)菌(jun)的(de)玻(bo)(bo)(bo)璃紙(zhi)剪取一小片，貼(tie)放在載(zai)(zai)玻(bo)(bo)(bo)片上(shang)用顯微鏡觀(guan)察(cha)。

實驗試劑

乳酸(suan)石炭(tan)酸(suan)棉(mian)藍染色液，20％甘油，查氏培(pei)養基平板，馬鈴(ling)薯(shu)培(pei)養基；

實驗設備

無菌吸(xi)管，載(zai)玻片，蓋玻片，U形棒，解剖(pou)刀，玻璃(li)紙，濾(lv)紙等。

實驗材料

曲霉(mei)（Aspergillussp．），青霉(mei)（Penicillium sp．），根霉(mei)（Rhizopus sp．），毛(mao)霉(mei)（Mucor sp．）；

實驗步驟

1．一般觀察法

　　于(yu)潔凈載玻片(pian)上(shang)，滴(di)一滴(di)乳酸石(shi)炭酸棉藍(lan)染色液(ye)，用解剖針從霉(mei)菌菌落的邊緣處取小量(liang)帶有孢子(zi)的菌絲(si)置染色液(ye)中，再細心地(di)將菌絲(si)挑散開，然后(hou)小心地(di)蓋(gai)上(shang)蓋(gai)玻片(pian)，注(zhu)意不要產生氣(qi)泡。置顯微鏡(jing)下先用低倍鏡(jing)觀(guan)察，必要時再換(huan)高倍鏡(jing)。

2．載玻片觀察法

　　(1)將略小于培養皿底內徑(jing)的(de)濾紙放入皿內，再放上(shang)(shang)U形(xing)玻棒，其上(shang)(shang)放一潔(jie)凈的(de)載玻片(pian)，然后將二個蓋玻片(pian)分別斜立在載玻片(pian)的(de)兩端，蓋上(shang)(shang)皿蓋，把數套（根據(ju)需要(yao)而定）如此裝置的(de)培養皿疊起，包扎好，用(yong)1．05kg/cm2，121．3℃滅菌20分鐘或干熱(re)滅菌，備用(yong)。

　　(2)將6—7ml滅(mie)菌的(de)馬鈴薯葡萄糖培(pei)養基(ji)倒(dao)入直徑為(wei)9cm的(de)滅(mie)菌平(ping)皿中，待凝固后，用無菌解剖刀切成0．5—1cm2的(de)瓊(qiong)脂塊(kuai)，用刀尖鏟起瓊(qiong)脂塊(kuai)放在已滅(mie)菌的(de)培(pei)養皿內(nei)的(de)載玻片上，每片上放置2塊(kuai)。

　　(3)用滅(mie)菌的(de)尖細接種針或裝有(you)柄的(de)縫衣針，取（肉眼方(fang)能看見的(de)）一(yi)點霉菌孢子，輕輕點在(zai)(zai)瓊(qiong)脂塊(kuai)的(de)邊緣上，用無菌鑷子夾(jia)著立在(zai)(zai)載玻(bo)(bo)片旁(pang)的(de)蓋玻(bo)(bo)片蓋在(zai)(zai)瓊(qiong)脂塊(kuai)上，再蓋上皿蓋。

　　(4)在培養皿的濾紙上，加無菌的20％甘油數毫升，至濾紙濕潤即可停加。將培養皿置28℃培養一定時間后，取出載玻片置顯微鏡下觀察。　

3．玻(bo)璃紙透(tou)析培(pei)養(yang)觀(guan)察法

　　(1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水，洗下孢子(zi)(zi)，制(zhi)成孢子(zi)(zi)懸液。

　　(2)用無(wu)菌鑷子將(jiang)已滅菌的、直徑與培養(yang)皿相同的圓形玻璃紙(zhi)覆(fu)蓋于查氏培養(yang)基平板(ban)上。

　　(3)用1ml無菌吸(xi)管(guan)吸(xi)取0．2ml孢子懸液于(yu)上(shang)述(shu)玻璃(li)紙平板上(shang)，并用無菌玻璃(li)刮棒涂抹(mo)均(jun)勻(yun)。

　　(4)置(zhi)28℃溫室培養48小時后(hou)，取出培養皿，打開(kai)皿蓋，用鑷子(zi)將玻璃紙與培養基分(fen)開(kai)，再用剪(jian)刀剪(jian)取一(yi)小片(pian)玻璃紙置(zhi)載玻片(pian)上，用顯微鏡觀察(cha)。

注意事項

　　1．結果

　　繪(hui)圖說明你所(suo)觀察到的霉菌(jun)形態特征(zheng)。