Super ECL Plus（超敏化學發光檢測試劑盒） 

產品貨號：S6009M

產(chan)品規格：100 mL

儲存條件：4℃密封避光保(bao)存，短期(qi)可放(fang)置于室溫(wen)。有效期(qi)見(jian)外(wai)包裝。 

產品介(jie)紹：

Super ECL Plus 免疫印跡底物是增強型化學發光（ECL） 過氧化物酶的底物，可幫助用戶在免疫印跡分析過程中實現 低表達或高價值蛋白的檢測。 Super ECL Plus 底物可為使用辣根過氧化物酶（HRP）偶 聯物的免疫印跡實驗提供明亮的信號，對低表達或高價值蛋 白檢測靈敏度很高。該 ECL 底物能夠兼容各種膜、封閉液 和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價比，滿 足用戶的免疫印跡應用需求。 Super ECL Plus（超敏）特(te)點(dian)： 1. 具有靈敏(min)度(du)：檢測硝化(hua)纖維素膜(mo)或 PVDF 膜(mo)上低表 達或高價值的蛋白條帶； 2. 長(chang)信(xin)號持續時間(jian)：條件優化的情況下，經底物孵育的印 跡(ji)條帶能(neng)夠持續輸出 6 至 8 h 的可檢測光信號； 3. 價格經(jing)濟：配方經(jing)過優(you)化，適(shi)用(yong)于(yu)濃(nong)度極低的抗體(ti)檢測(ce)。 • 0.2-1 μg/mL 一抗（或 1 mg/mL 的稀釋 1:1,000-1:5,000） • 10-50 ng/mL 二抗（或(huo) 1 mg/mL 的稀(xi)釋 1:20,000-1:100,000）

使(shi)用方法：

1. 執行常(chang)規 SDS-PAGE 電(dian)泳、轉膜和(he) Western Blot 步驟，1.0-0.2 μg/mL 一抗室溫孵育 1 h 或 4℃過夜，洗(xi)膜(mo)后，10-50 ng/mL 二抗(kang)孵育 30-60 min。 2. Western Blot 最后一次洗(xi)膜時(shi)，新(xin)鮮(xian)配制發光工(gong)作液：分 別取等(deng)體積的(de)溶液(ye) A 和 B，混勻。 注：建議立(li)即(ji)使用工作液，室(shi)溫放置數小(xiao)時后仍可使用但靈 敏度略有降低(di)。 3. 成像儀檢(jian)測：用鑷子取出 PVDF 膜置于(yu)成像儀(yi)檢測板上， 含蛋(dan)白面(mian)朝上，瀝(li)干(gan)洗液(ye)但勿使膜干(gan)燥。將發(fa)光工(gong)作液(ye) （0.125 mL 發光工作液/cm2 膜）滴加在(zai) PVDF 膜(mo)上，使發(fa) 光液(ye)覆蓋 PVDF 膜，室溫孵(fu)育 3-5 min，參(can)考儀器說明 書進行檢(jian)測。 4. 壓片檢測：用鑷(nie)子取出 PVDF 膜置于(yu)保鮮膜上，含蛋白 面朝上，瀝(li)干洗(xi)液但勿使膜干燥(zao)。將發(fa)光工作(zuo)液（0.125 mL 發光工作(zuo)液(ye)/cm2膜）滴加在 PVDF 膜(mo)上(shang)，使發光(guang)液覆蓋 PVDF 膜，室溫孵育 3-5 min，棄(qi)發光工作液，用(yong)保鮮 膜包好(hao)，將膜固(gu)定于片夾內，含蛋(dan)白面(mian)向上。暗室內壓片 1 min，立即顯影，根據結果再調整壓(ya)片時間。或分別壓(ya)片 0.5、 1、3、5 min，然后一起顯影觀(guan)察結果。

注意(yi)事項：

1. 發光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能有降低，操作 時注意避光。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2. 長時間曝光會加深背景；蛋白過量，會使條帶強弱變化失去線性關系；曝光不足，則條帶模糊或較淺。 3. 如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育 二抗，然后重新用 ECL 曝光。 4. 使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。 5. NaN3 會抑制 HRP 活性，回收二抗應避免使用 NaN3，如 必需使用勿超過 0.01%。