Cell Counting Kit-8（CCK-8）細胞增殖試劑盒

產品貨(huo)號：C6005M

產品規(gui)格：500T

儲(chu)存(cun)條件：4℃避(bi)光保存，長(chang)期儲存置(zhi)于-20℃，有效期見外(wai)包裝。

產(chan)品介紹：

Cell Counting Kit-8簡稱(cheng)CCK8（或WST-8）試劑(ji)盒，是一種基(ji)于WST-8（化(hua)學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4- 二(er)磺(huang)基苯)-2H-四唑(zuo)單鈉鹽(yan)）顯色(se)反(fan)應的廣(guang)泛應用于(yu)細胞增(zeng)殖(zhi)和細胞毒(du)性的快(kuai)速高靈敏度檢測(ce)試劑盒。 

WST-8 工作原理：在電子耦合試劑存在的條件下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物 （formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映 活細胞數量。 

WST-8 是 MTT 的一種升級替代產品，和 MTT 或其它 MTT 類似產品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優點。首先，MTT 被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的甲臜不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而 WST-8、XTT 和 MTS 產生的甲臜 都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，WST-8 產生的甲臜比 XTT 和 MTS 產生的甲臜更易溶解。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩定，使實驗結果更加穩定。另外，WST-8 與 MTT、XTT 相比線性范圍更寬，靈敏度更高。 

CCK 法廣泛應用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等方面。

使用(yong)方法：

1. 細胞活性檢測

（1）在 96 孔板中接種細胞懸液（100 μL/孔），建議可以設置 8 個細胞濃度梯度，每個濃度設置 6 個重復進行細胞鋪板， 例如按照細胞個數 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進行鋪板。將培養板放在培養箱中培養過夜（37℃, 5% CO2）。

（2）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。 注：如產品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。 

（3）將培養板在培養箱內孵育 0.5 - 4 h。 注：初次實驗可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。 

（4）用酶標儀測定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。 （5）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并將培養板在室溫條件下避 光保存。24 h 內測定，吸光度不會發生變化。

2. 細胞增殖-毒性檢測

（1）在 96 孔板中接種 100 μL 的細胞懸液，建議可以設置 8 個細胞濃度梯度，每個濃度設置 6 個重復進行細胞鋪板，例如 按照細胞個數 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進行鋪板。將培養板放在培養箱中培養過夜（37℃, 5% CO2）

（2）向培養板加入 1 - 10 μL 特定的藥物刺激。 

（3）于培養箱中孵育一段時間（例如：6、12、24 或 48 h）。

（4）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數）。 注：如產品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。

（5）將培養板在培養箱內孵育 0.5 – 4 h。 注：初次實驗可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。

（6）用酶標儀測定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。

（7）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養板避光保存在室 溫條件下。24 h 內測定，吸光度不會發生變化。

注：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然 后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的 空白吸收即可。

3. 計算公式

細胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x100% 抑制率 =[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100% As:實驗孔(含有細胞的培養基、CCK-8、待測藥物)的吸光度 Ac:對照孔(含有細胞的培養基、CCK-8、沒有待測藥物)的吸光度 Ab:空白孔(不含細胞和待測藥物的培養基、CCK-8)的吸光度

注意事(shi)項

1. 使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。

2. 使用96孔進行細胞鋪板，如果培養時間較長， 一定要注意蒸發問題。建議采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、 水或者培養液。 

3. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。 

4. 本產品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。 

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。